临床医生朋友们是否还苦于写课题文章没有好的思路？Dr.S教你一招吃遍天，在上一期中，我们的Dr.S已经给大家介绍了肝癌经典有效的研究方法，今天咱们介绍一下白血病，分析一篇2017年发表在Cancer Cell（IF=23.214分）上的文章，还是用我们经典的ABCD四要素模式来分析。这次的侧重点依然是研究课题基因的寻找也就是后面我要讲的四要素中A基因的来源。
如何找到一个合适的基因进行临床和基础研究，这其实是阻扰不少临床医生科研开展的一道门槛；不过，Dr.S会在系列讲座中教给医生朋友们如何跨过这道门槛。
老生常谈，我们先解读一下题目：TRIB3 Promotes APL Progression through Stabilization of the Oncoprotein PML-RARα and Inhibition of p53-Mediated Senescence.
发现了没有，还是A基因通过B信号通路在C疾病中发挥D功能的经典思路，今天就是要教您如何用好这4要素。
A基因、C疾病的由来：
C疾病：本文章的研究疾病为急性早幼粒细胞白血病（APL），课题研究选题方向取决于医生所在的领域。
A基因的由来：
作者分选收集了3例正常人及3例急性髓细胞白血病（AML）患者的CD34+细胞，以此为基础使用芯片进行差异编码基因的筛选。通过对芯片结果的注释分析，作者最终决定聚焦在表达上调幅度排名前20的基因TRIB3进行后续研究。回到临床样本上，作者发现TRIB3在AML的一种亚型APL患者中表达水平相较其他亚型要高很多，并且与PML-RARα（APL的分子标志物）的表达正相关（Fig 1）。
Fig 1
Dr.S小贴士：
这篇文章给我们最大的提示是，如果医生朋友所研究的疾病或肿瘤有很多亚型，可以先选取具有主流临床特征的样本通过基因芯片筛选有意义的基因，而后返回到临床样本中进行验证以确定与该基因相关性最高的一个亚型进行后续研究。
D功能：
作者分别构建了针对基因TRIB3的条件敲除和敲入鼠，检测了APL分子标记物PML-RARα在不同鼠中的表达情况，并取出其原发性造血祖细胞进行克隆形成实验佐证结论（即基因TRIB3的表达促进了APL的发生）（Fig2）；与此同时，对来自病人的APL细胞进行了TRIB3干扰实验，并监测其表型，进一步对结论进行验证。
Fig2
B分子机制：
机制研究方面，如文章标题所示，分为两个部分（Stabilization of the Oncoprotein PML-RARa 和 Inhibition of p53-Mediated Senescence），按照文章阐述顺序，咱先看后面一个部分，作者干扰基因TRIB3之后，检查P53信号通路中各因子的表达情况，发现P53被激活了（Fig3）， 进而实施TRIB3和P53双干扰联合实验，证明了TRIB3促进APL的过程确实与P53有关。
对于另一部分，在文章前期结果中作者已经证明了TRIB3是通过抑制PML-RARα/PML的泛素化水平来调节其表达的，而后通过Co-IP验证了TRIB3与PML-RARa/PML有直接相互作用（Fig4），并寻找到TRIB3在PML上的作用位点，进而深入研究此位点与两者相互作用之间的关系。
Fig 3
Fig 4
好了，一篇漂亮又严谨的故事就这么产生了，TRIB3通过提高PML-RARα的稳定性（抑制泛素化）促进急性早幼粒细胞白血病的进展。
文章解读小结：
1. 要发表高分的SCI文章，ABCD模式一招鲜吃遍天，发现A基因（转录组测序，表达谱芯片或者蛋白质组学筛选），阐述其在C疾病中的D功能：细胞学功能和动物模型；以及B信号通路：分子机制(上游+下游)、功能回复实验。
2. 对于待研基因，阐述其在某种疾病中的功能：临床相关性、细胞学功能、分子机制(上游+下游)、信号通路、功能恢复实验、动物模型、实验结论的临床回顾，关键在于“新基因”—新疾病—新机制。
根据吉凯基因的经验，从样本出发芯片，测序，质谱方法高通量筛选新功能基因的概率大约在10%左右，想要筛选验证得到一个新功能基因的难度非常大。吉凯基因历经3年，斥资上亿，已完成近6000个肿瘤相关基因的功能学筛选，从中找到明确的肿瘤功能标志基因若干，等待您来寻宝～～～
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