1. 处死动物，分离下颌骨，自中缝处将其分为两半。

2. 打开髓腔，取出牙髓，去除顶端的apical button，在培养皿中用显微剪剪碎，注意冰上操作。

3. 将牙髓转入15ml离心管中，终浓度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃，5% CO2条件下消化40min。

4. 加入完全培养基（MEM+10%FBS+1%双抗）终止消化，4℃，360g离心10min收集沉淀。

5. PBS清洗一遍，离心收集沉淀，完全培养基重悬，过筛后铺板。

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,它包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前已经成功分离培养包括来自骨髓、肌肉、神经、上皮等组织的成体干细胞。牙髓干细胞是位于牙髓组织的一种成体干细胞。2000年,Gornhtos等首先成功地分离培养出人牙髓干细胞,为干细胞的研究开辟了一个新的领域。牙髓干细胞具有同其他成体干细胞相似的生物学特性,具有较强的克隆形成能力,可以分化为牙髓组织中的终末功能细胞并具有一定的横向分化能力。目前国内外只有人牙髓干细胞培养成功的报道,鼠牙髓干细胞的相关研究国内外还未见报道,而鼠是实验研究最常用的模型,它具有取材容易、与人同源性较高等优点。

大鼠牙髓干细胞特性

1)组织来源于实验动物的正常牙组织。

2)细胞鉴定:STRO-1免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式:长梭形,不规则细胞,贴壁培养。

大鼠牙髓干细胞产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

温馨提醒:

1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞*传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。

2、确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。